ED Sciences Chimiques
Isolation, caractérisation et hétéromérisation du récepteur à la dopamine D₂
par Nejma RABHI (Institut de Chimie & de Biologie des Membranes & des Nano-objets)
Cette soutenance a lieu à 13h30 - Amphithéâtre IECB, 2 Rue Robert Escarpit, 33600, Pessac
devant le jury composé de
- Sylvie CLAEYSEN - Chargée de recherche - Université de Montpellier - Rapporteur
- Astrid WALRANT - Maîtresse de conférences - Sorbonne Université - Rapporteur
- Olivier LAMBERT - Directeur de recherche - Université de Bordeaux - Examinateur
- Birgit HABENSTEIN - Directrice de recherche - Université de Bordeaux - Examinateur
Cette thèse de doctorat étudie le rôle de la composition lipidique membranaire dans l'hétéromérisation, la dynamique et la signalisation du récepteur D₂ de la dopamine (D₂R), un RCPG clé impliqué dans la schizophrénie et d'autres troubles neurologiques. Le travail s'articule autour de deux axes principaux : (i) l'expression, l'isolement et la caractérisation du D₂R fonctionnel dans divers systèmes membranaires (in cellulo, ex cellulo, in vitro), et (ii) l'étude in cellulo des hétéromères du D₂R, en particulier D₂-CB₁, en se concentrant sur leur localisation, leur dynamique et leur signalisation intracellulaire. Pour répondre aux défis posés par l'instabilité des RCPG en dehors de leur environnement lipidique natif, plusieurs stratégies ont été employées pour l'extraction et la purification du D₂R. Les méthodes à base de détergents (par exemple, LMNG/CHS, DDM/CHAPS/CHS) ont été optimisées pour équilibrer pureté et fonctionnalité, bien qu'elles perturbent souvent l'environnement lipidique natif du récepteur. En alternative, les nanodisques à base de copolymères (DIBMA 12) ont été explorés, préservant l'environnement lipidique du récepteur et offrant une meilleure rétention fonctionnelle, confirmée par le test GTPase Glo et la polarisation de fluorescence (FP). Ces nanodisques permettent un contrôle total de la composition lipidique et facilitent les études structurelles et fonctionnelles dans un contexte proche du natif. La caractérisation fonctionnelle du D₂R a été réalisée grâce à la FP et au test innovant GTPase Glo, qui mesure l'activation des protéines G après stimulation par un ligand, surmontant ainsi les limites des méthodes traditionnelles de FP. De plus, la microscopie TIRF et les tests BRET ont été utilisés pour étudier la dynamique et la signalisation des hétéromères D₂-CB₁ dans des cellules vivantes, fournissant des informations sur leur localisation, leurs interactions et leurs effets en aval. Ce travail met en lumière le rôle crucial des lipides dans la modulation de la structure, de la stabilité et de la signalisation du D₂R, offrant de nouvelles perspectives pour comprendre le fonctionnement des RCPG dans des contextes physiologiques et pathologiques, tels que la schizophrénie. Les méthodes optimisées pour isoler le D₂R fonctionnel dans des environnements lipidiques contrôlés ouvrent la voie à des études structurelles et pharmacologiques avancées, visant ultimement à améliorer les stratégies thérapeutiques pour les troubles neurologiques.